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Biocolor F2000 彈性蛋白檢測(cè)試劑盒科研應(yīng)用指南

更新時(shí)間:2025-04-10      點(diǎn)擊次數(shù):306

Biocolor F2000 彈性蛋白檢測(cè)試劑盒科研應(yīng)用指南

——定量組織與細(xì)胞外基質(zhì)中彈性蛋白的精準(zhǔn)方案

一、檢測(cè)原理與產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1.1 比色法檢測(cè)機(jī)制

特異性結(jié)合:試劑含 磺酸化四唑鎓鹽,與彈性蛋白的 非極性氨基酸殘基(如Val, Pro, Gly)選擇性結(jié)合,形成 紫色復(fù)合物(λmax=513nm)。

動(dòng)態(tài)范圍:0.2-50 μg彈性蛋白/樣本(R2>0.99),靈敏度 0.1 μg(優(yōu)于ELISA法)。

1.2 試劑盒核心組分

組分編號(hào) 名稱 作用與特性

F2000-A 提取緩沖液 0.25M NH?OH,溶解交聯(lián)彈性纖維

F2000-B 染色試劑 避光保存,反應(yīng)后OD值與濃度呈線性

F2000-C 洗滌液 0.1% SDS,降低非特異性吸附

1.3 適用樣本類型

推薦樣本:

? 皮膚/血管組織勻漿(建議≤50mg濕重)

? 細(xì)胞培養(yǎng)上清(需10倍濃縮)

? 病理切片(需配合顯微分光光度計(jì))

二、標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)流程

2.1 樣本前處理

組織提取協(xié)議:

復(fù)制

1. 20mg組織加入500μL F2000-A  

2. 95℃加熱2小時(shí)(釋放交聯(lián)彈性蛋白)  

3. 12,000g離心10分鐘,取上清檢測(cè)  

細(xì)胞樣本處理:

使用 F2000-A 裂解后,需通過(guò) 10kDa超濾管 濃縮

2.2 檢測(cè)步驟

復(fù)制

1. 加樣:  

  - 標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL96孔板(建議復(fù)孔)  

2. 染色:  

  - 加入50μL F2000-B,37℃避光振蕩30min  

3. 洗滌:  

  - F2000-C沖洗3次(每次200μL)  

4. 檢測(cè):  

  - 513nm測(cè)OD值(參考波長(zhǎng)650nm)  

2.3 數(shù)據(jù)計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合(示例):

復(fù)制

濃度(μg)   OD513-OD650  

0           0.012  

5           0.328  

10          0.701  

→ 擬合方程:y=0.068x + 0.011 (R2=0.998)  

三、性能驗(yàn)證與問(wèn)題排查

3.1 質(zhì)量控制指標(biāo)

合格標(biāo)準(zhǔn):

? 空白孔OD<0.05

? 標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.98

? 批內(nèi)CV<8%n=3

3.2 典型應(yīng)用數(shù)據(jù)

案例1:皮膚衰老研究

年輕vs年老小鼠真皮:

復(fù)制

年輕組:12.3±1.2 μg/mg組織  

年老組:6.8±0.9 μg/mg組織(p<0.01)  

案例2:藥物干預(yù)效果

TGF-β抑制劑處理組:

彈性蛋白合成增加 2.4倍(vs對(duì)照組)

3.3 故障診斷表

現(xiàn)象 可能原因 解決方案

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差 染色時(shí)間不足 延長(zhǎng)反應(yīng)至45分鐘

樣本OD值超出范圍 未充分提取 增加加熱時(shí)間至3小時(shí)

背景值過(guò)高 增加至5次洗滌

四、技術(shù)問(wèn)答(Q&A

Q1:能否檢測(cè)彈性蛋白降解產(chǎn)物?

可檢測(cè) α-彈性蛋白(使用F2000-A提取),但需注意 elastin peptides 需專用抗體檢測(cè)

Q2:與Masson染色相關(guān)性?

比色法結(jié)果與 Verhoeff染色 陽(yáng)性面積顯著相關(guān)(r=0.89, p<0.001),但與Masson染色無(wú)直接可比性

文檔優(yōu)化建議:

插入 【標(biāo)準(zhǔn)曲線示例圖】(含95%置信區(qū)間)

添加 組織提取操作視頻 二維碼

關(guān)鍵步驟標(biāo)注 ??注意(如"避免使用金屬器械"



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