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不同品牌的熒光染料對Qubit RNA IQ Assay Kit檢測原理有何影響?

更新時間:2025-05-01      點擊次數(shù):369
不同品牌的熒光染料對Qubit RNA IQ Assay Kit檢測原理有何影響?
Qubit RNA IQ Assay Kit 通常使用的是 Invitrogen 公司專有的熒光染料,不同品牌的熒光染料可能在多個方面影響該試劑盒的檢測原理及結果:

  • 結合特性不同

    • 特異性:Qubit RNA IQ Assay Kit 的原配熒光染料對 RNA 具有高度特異性,能準確結合 RNA,排除其他生物分子如 DNA、蛋白質(zhì)等的干擾。若使用其他品牌熒光染料,可能無法如此精準地特異性結合 RNA,比如一些染料可能也會與 DNA 有一定程度的結合,從而導致檢測結果中 RNA 濃度出現(xiàn)偏差,因為檢測到的熒光信號可能包含了 DNA 與染料結合產(chǎn)生的部分。

    • 結合位點與親和力:原配熒光染料與 RNA 的結合位點和親和力經(jīng)過精心設計,可保證在一定條件下與 RNA 充分且穩(wěn)定結合,準確反映 RNA 的量。不同品牌染料的結合位點和親和力可能不同,可能無法在相同條件下與 RNA 達到最佳結合狀態(tài),例如結合過強可能導致染料難以從 RNA 上解離,影響檢測的動態(tài)范圍;結合過弱則可能在檢測過程中染料脫落,使熒光信號不穩(wěn)定,最終影響濃度測定的準確性。

  • 熒光特性差異

    • 激發(fā)與發(fā)射波長:Qubit 儀器是根據(jù)原配熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長特性進行優(yōu)化設計的。其他品牌熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長可能與原配染料不同,若使用這些染料,Qubit 儀器可能無法提供合適的激發(fā)光,或者不能有效檢測到發(fā)射光,導致無法準確測量熒光信號強度,進而無法準確得出 RNA 濃度。

    • 熒光量子產(chǎn)率:熒光量子產(chǎn)率決定了熒光染料在吸收光能后發(fā)射熒光的效率。原配熒光染料具有較高且穩(wěn)定的量子產(chǎn)率,能保證在與 RNA 結合后產(chǎn)生較強且穩(wěn)定的熒光信號,以實現(xiàn)準確檢測。不同品牌的染料量子產(chǎn)率可能較低,產(chǎn)生的熒光信號較弱,增加了檢測的背景噪音,降低了檢測的靈敏度和準確性;或者量子產(chǎn)率不穩(wěn)定,會使熒光信號隨時間或環(huán)境條件變化而波動,影響結果的重復性。

  • 對 RNA 質(zhì)量評估的影響

    • 片段大小區(qū)分能力:Qubit RNA IQ Assay Kit 的原配染料通過對不同大小 RNA 片段的熒光信號分布分析,來評估 RNA 的完整性,如計算 RIN 值和 28S/18S 比值等。不同品牌的熒光染料可能對不同大小 RNA 片段的結合特性不同,無法準確反映不同片段的真實分布情況,導致計算出的 RIN 值和 28S/18S 比值不準確,不能真實反映 RNA 的質(zhì)量。

    • 構象敏感性:原配熒光染料對 RNA 的二級結構等構象有一定的敏感性,能更全面地評估 RNA 的質(zhì)量。而其他品牌染料可能對 RNA 構象不敏感,無法檢測到 RNA 結構變化對其質(zhì)量的影響,從而使檢測結果不能準確反映 RNA 的實際質(zhì)量狀況。


由于不同品牌的熒光染料在結合特性、熒光特性以及對 RNA 質(zhì)量評估方面與 Qubit RNA IQ Assay Kit 原配熒光染料存在差異,會影響試劑盒檢測原理的實現(xiàn),導致檢測結果不準確、不可靠,因此不建議在該試劑盒中隨意使用其他品牌的熒光染料。



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