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腫瘤單細(xì)胞制備的難點(diǎn)是什么?

更新時(shí)間:2025-05-17      點(diǎn)擊次數(shù):136
腫瘤單細(xì)胞制備存在諸多難點(diǎn),主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:


  • 組織異質(zhì)性:腫瘤組織由多種細(xì)胞類型構(gòu)成,包括腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等,且不同細(xì)胞間的物理特性和生物學(xué)特性差異顯著。同時(shí),腫瘤細(xì)胞本身還存在高度的異質(zhì)性,在基因表達(dá)、細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)以及細(xì)胞功能等方面均有不同。這就導(dǎo)致在制備單細(xì)胞時(shí),很難找到一種通用的方法來(lái)高效且溫和地將所有類型的細(xì)胞分離出來(lái),并且保證每種細(xì)胞的完整性和活性。

  • 細(xì)胞間連接復(fù)雜:腫瘤細(xì)胞之間以及腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間存在著復(fù)雜的連接結(jié)構(gòu),如緊密連接、橋粒、黏著斑等,這些連接使得腫瘤組織具有較高的機(jī)械強(qiáng)度。要將腫瘤組織解離成單細(xì)胞,就需要破壞這些連接,但常用的解離方法如酶解、機(jī)械解離等,在破壞連接的同時(shí),容易對(duì)細(xì)胞造成損傷,影響細(xì)胞的活性和功能。

  • 細(xì)胞活性與功能維持:在制備單細(xì)胞的過(guò)程中,無(wú)論是酶解、機(jī)械處理還是化學(xué)處理,都可能對(duì)細(xì)胞造成一定的應(yīng)激和損傷,導(dǎo)致細(xì)胞活性下降、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路改變以及細(xì)胞功能受損。而對(duì)于后續(xù)的單細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn),如單細(xì)胞測(cè)序、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞功能檢測(cè)等,都需要細(xì)胞保持較高的活性和完整的功能,才能獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,如何在單細(xì)胞制備過(guò)程中地維持細(xì)胞的活性和功能,是一個(gè)關(guān)鍵的難點(diǎn)。

  • 避免細(xì)胞團(tuán)聚:解離后的單細(xì)胞在懸液中容易發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象,這是由于細(xì)胞表面的電荷、蛋白質(zhì)等物質(zhì)相互作用,以及細(xì)胞之間的黏附力所致。細(xì)胞團(tuán)聚不僅會(huì)影響單細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分析,還可能導(dǎo)致部分細(xì)胞被包裹在團(tuán)塊中,無(wú)法被后續(xù)的實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)到,從而造成細(xì)胞信息的丟失。防止細(xì)胞團(tuán)聚需要在解離過(guò)程中加入適當(dāng)?shù)脑噭?,如蛋白酶抑制劑、抗氧化劑等,同時(shí)還需要優(yōu)化操作流程,盡量減少細(xì)胞在懸液中的停留時(shí)間。

  • 雜質(zhì)去除:腫瘤組織中除了細(xì)胞成分外,還含有細(xì)胞外基質(zhì)、血液成分、壞死組織等雜質(zhì)。在單細(xì)胞制備過(guò)程中,如果這些雜質(zhì)不能被有效地去除,會(huì)對(duì)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾。例如,細(xì)胞外基質(zhì)可能會(huì)影響細(xì)胞的分散和貼壁,血液中的紅細(xì)胞會(huì)干擾細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析,壞死組織中的細(xì)胞碎片可能會(huì)激活細(xì)胞的免疫反應(yīng),影響細(xì)胞的功能狀態(tài)。因此,需要采用合適的方法去除這些雜質(zhì),以獲得純凈的單細(xì)胞懸液。



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